PEI線(xiàn)性轉染試劑特點(diǎn)及常見(jiàn)問(wèn)題

一、PEI線(xiàn)性轉染試劑

PEI又稱(chēng)為線(xiàn)性化聚乙烯亞胺，是人工合成的含有高密度正電荷的有機大分子陽(yáng)離子聚合物。PEI與DNA通過(guò)正負電荷的相互吸引形成復合物，是較為有效的聚陽(yáng)離子型基因載體，轉染效率高。PEI轉染試劑可以方便地進(jìn)行化學(xué)修飾，并且不會(huì )像脂質(zhì)體一樣破壞細胞結構，所以相對毒性較低。

二、PEI Max轉染試劑(24765-1)特點(diǎn)

·轉染效率高，細胞毒性低；

·蛋白表達量高；

·節約成本：PEI至少能夠降低40%的轉染試劑總成本；

·適用于HEK293等真核細胞的轉染；

·適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；

·適用于有血清和無(wú)血清的轉染條件；

·無(wú)機試劑，無(wú)動(dòng)物源成分；

·產(chǎn)品穩定，質(zhì)控嚴格；

·工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化，適合小規模培養板、培養瓶到大規模的生物反應器。

三、PEI轉染試劑性能

圖1 轉染PEI后的抗體表達

500mL HEK293細胞(A、C、E)和CHO細胞(B、D、F)細胞培養物轉染LPEI、PEI Max和PEI pro^TM。采用蛋白-A HPLC法檢測單克隆抗體曲妥珠單抗(A、B)、Palivizumab單抗(C和D)和B72-3(E和F)的滴度，與LPEI(PEI 25K)相比，當使用PEI Max和PEI pro^TM時(shí)，三種抗體的表達量都較高，但使用PEI Max試劑轉染能使所有抗體都有最高表達。由此可見(jiàn)，PEI Max轉染試劑(MW 40000)具有更高的轉染效率。

四、轉染中的常見(jiàn)問(wèn)題

1.轉染效率低

原因：(1)細胞活力：使用活力好傳代小于15代的細胞。

(2)細胞接種密度高/低：適當降低/增加接種密度。

  (3)PEI/DNA比率不合適：進(jìn)行不同基因轉染時(shí)應對PEI和DNA的比例進(jìn)行優(yōu)化，以達到最適比例。

(4)質(zhì)粒片段較大：可根據實(shí)際實(shí)驗需要調整，如適當增加轉染質(zhì)?？偭康?。

  (5)混合方式不當：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時(shí)避免渦旋。同時(shí)要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。

2.細胞毒性高

原因：(1)轉染液孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)：過(guò)長(cháng)時(shí)間 PEI/DNA 復合體會(huì )導致細胞毒性。

(2)細胞接種密度低：適當增加接種密度。

(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。

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