石蠟切片Protocol實(shí)驗需要注意哪些要點(diǎn)呢？

石蠟切片是一種常見(jiàn)的組織學(xué)技術(shù)，用于觀(guān)察組織的微觀(guān)結構。在進(jìn)行石蠟切片實(shí)驗時(shí)，有許多細節需要注意，這些細節往往決定了切片的質(zhì)量和結果的準確性。那么石蠟切片Protocol實(shí)驗需要注意哪些要點(diǎn)呢？本期內容將為你揭示一些關(guān)鍵的細節，助你獲得最佳的石蠟切片效果。

1. 組織固定

1）取新鮮組織，分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過(guò)1cm3，用預冷的PBS沖洗，置于10%的福爾馬林固定液中固定24小時(shí)。

2）取出組織，蒸餾水沖洗30分鐘。

2. 組織脫水，包埋，切片

1）自動(dòng)脫水：設定脫水程序，70%酒精30min----80%酒精2小時(shí)----95%酒精2小時(shí)----95%酒精2小時(shí)----100%酒精2小時(shí)----100%酒精2小時(shí)。脫水的目的是除去組織中的水分，便于透明、浸蠟、包埋等步驟的進(jìn)行，因為這些程序中所用的藥品都不能與水混合，所以必須脫水。常用的脫水劑為酒精。脫水過(guò)程應緩慢進(jìn)行，不能操之過(guò)急或時(shí)間過(guò)長(cháng)，以免組織變硬變脆或發(fā)生收縮現象。

2）透明: 二甲苯, 30min/次，2次。透明的目的是將脫水劑從材料中除去，使材料透明，增記折光系數；同時(shí)便于下步的浸蠟和包埋等程序（因為酒精不能溶解石蠟）。透明劑是一種既能與脫水劑混合，又能與包埋劑混合的藥劑。常用的透明劑為二甲苯和氯仿，適用原則也是逐級進(jìn)行，可減少材料收縮。

3）浸蠟: 組織經(jīng)透明后放入熔化的石蠟（熔點(diǎn)為52℃）內，1小時(shí)/次，3次。浸蠟的目的是逐漸除去透明劑,并為包埋劑所代替。常用的包埋劑是石蠟。浸蠟過(guò)程是使石蠟慢慢溶于浸有材料的透明劑中，溶解在透明劑中的石蠟漸漸深入到材料的細胞中去，最后使透明劑wan全被石蠟取代，以便切片。浸蠟過(guò)程一般是從低溫到高溫、從低熔點(diǎn)到高熔點(diǎn)逐漸進(jìn)行，這一過(guò)程不能操之過(guò)急，否則浸蠟不che底影響切片。此外，軟材料可用熔點(diǎn)較低石蠟，較硬的材料可用熔點(diǎn)較高的石蠟；冬季可用熔點(diǎn)較低的石蠟，夏季可用熔點(diǎn)較高的石蠟。石蠟必須純凈，不含雜質(zhì)。整個(gè)浸蠟過(guò)程需在恒溫箱內進(jìn)行。

4）包埋：將熔化的石蠟倒入包埋框再將組織塊放入，放入時(shí)不能有氣泡，冷卻臺上冷卻30分鐘。注意將樣品編號封于蠟塊上，以免樣品混淆。

5）常規石蠟切片：厚度6um，連續切片。

6）石蠟切片脫水：60℃烤片30min，可室溫保存。

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